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分子生物学中用液氮研磨组织方法

作者:admin日期:2022-02-10阅读

分子生物学是当前生命科学领域的学科,其理论与技术已进入到各学科领域,而分子生物学实验在生命学科中显得相当重要。在实际工作中,许多实验材料比如动物身上的肌肉组织、结缔组织、骨组织、毛发组织等,植物的根、茎、叶、种子等均需磨碎,随后才能对其成分、与蛋白质及结构和功能进行研究。


利用液氮研磨组织法在分子生物学实验中应用广

泛,特别是有关核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)的分离。液氮的温度为一196℃,它既能使各种组织成分不易被破坏或降解,又能使组织变硬,脆性增加易于磨碎。正是由于液氮的温度极低,操作时要特别小合。为此,我们摸索总结了一套简便而行之有效的方法。



1液氮容器的准备

液氮一般保存于液氮罐中。实验前先准备一个保温桶,将适量液氮转移至保温桶中,同时还要准备一个不锈钢或塑料汤勺,汤勺的柄不够长时要想办法加长,以免伤手。


2组织的处理及用量

任何组织在获得后如不立即使用,要尽快保存在低温环境中一196℃液氮中速冻,一70℃保存。使用时,植物组织应当先用自来水清洗外表的泥沙,用单蒸水冲洗两遍,用乙醇浸洗约秒,再用除菌双蒸水冲洗两遍,用无菌滤纸吸干,然后根据需要取适当部位的组织。动物组织不必清洗,但要尽量剔除周边的组织及血块。组织的取量要比实际需要量大一倍,因为研磨时部分组织会粘在研钵和研棒上,会致部分组织样本丢失。


3研钵的固定

我们在实验时发现,研钵在加液氮后温度很低,外表会形成许多冰晶,用力研磨组织时易打滑,研钵内的组织液氮混合物很容易溅出,造成组织丢失,也容易伤手。如果在研钵下垫些纱布或滤纸,虽不易滑动,但由于缓冲作用,研磨时不受力,不足取。后来我们作了如下改进一是做个木支架,即选一块厚约两寸的木板,在上面挖个半球形圆洞大小根据研钵大小而定,木板两端留一定长度以备手握之用,使用时将研钵卡在半球形洞中,既稳当又不会伤手二是备一条干净的毛巾或纱布干的,折成长条形,将研钵包围起来,两端合并后用手抓住,这个方法简单实用,但要特别小心,以免伤。


4研磨方法

空钵先用液氮预冷,再将研棒的上端用纱布包裹用力时手不会痛,组织建议切成薄片,研磨时不易溅出,也更容易磨碎,研棒建议顶着手心,这样便于用力。研磨过程中要避免液氮干涸,研磨至细粉即可。待液氮刚蒸发完时,用一个小药勺取出所需用量进行下一步实验,或者将组织粉末装人容器内,保存于一70℃的温度下,以备下一步实验使用。

使用得当的液氮研磨组织法,将为下一步实验成功奠定了基础。值得一提的是,操作中所有接触的器皿及耗材须清洗干净并。如果研磨组织用于提取时,使用的器皿及耗材必须采用焦碳酸二乙醋灭活RNase并进行高压处理。


5研磨球

建议使用威尼斯人登录网址,磨耗低,属于陶瓷球,不含重金属,研磨效率高。


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